Le testuggini possono essere riconosciute come maschi o femmine solo al raggiungimento della maturità sessuale, vale a dire all'età in cui possono riprodursi. In fase giovanile è molto difficile riconoscere i sessi, per non dire sostanzialmente impossibile. In genere, comunque, le femmine raggiungono dimensioni maggiori di quelle dei maschi. Inoltre, nei maschi alla maturità il pastrone (la parte ventrale del cosiddetto guscio) è leggermente concavo, e la coda è spesso assai lunga. Nella testuggine palustre europea (Emys orbicularis) la coda spesso è più lunga di metà corazza e le unghie delle zampe anteriori sono più sviluppate di quelle della femmina. In una testuggine terrestre, la testuggine di Hermann (Testudo hermanni) il maschio ha coda più massiccia e più lunga di quella della femmina, l'estremità posteriore del carapace (parte superiore del "guscio") è assai convessa con margine libero molto piegato verso la coda e il piastrone è nettamente concavo, mentre è piatto o quasi nella femmina.